El Parque Nacional es un zona muy restringida y controlada. Los visitantes sólo tiene acceso permitido a ciertas instalaciones, rutas e itinerarios especialmente diseñados para minimizar los efectos negativos sobre las especies y los ecosistemas. Estos son los siguientes:

- Tres itinerarios guiados: uno al sur a lo largo de las playas y a través de los bosques y dunas. Otro al norte, partiendo desde El Rocío y atravesando los pinares y alcornocales para entrar en las marismas. Y un tercero que, en un pequeño barco, discurre río arriba por el Guadalquivir desde Sanlúcar de Barrameda. Es necesario reservar para todos ellos.

- Siete centros de visitantes , ofrecen información, exhibiciones y, la mayoría de ellos, senderos autoguiados . Entrada libre y gratuita. Estos son:

       - Acebuche, cerca de Matalascañas
       - Acebrón y
       - La Rocina, cerca El Rocío
       - José Antonio Valverde, en las marismas del norte
       - Los Centenales (959 459 241), en Hinojos
       - Centro de información de Casagrande  (955 750 006,) en Aznalcazar
       - Fabrica de Hielo (956 381 635), en Sanlúcar de Barrameda

- Varios senderos de pequeña longitud. Además de los que se encuentran junto a la mayoría de los centros de visitantes ya mencionados, también tenemos el llamado Sendero Dunar,  al extremo Este de  Matalascañas y el precioso paseo alrededor de las Marismas de El Rocío.

- Tres senderos de mayor longitud. También es posible caminar a lo largo de la Raya Real (al Este de El Rocío), el Camino de Moguer (a lo largo de la orilla norte del Arroyo de La Rocina, al Oeste de El Rocío) y a lo largo de las playas del Parque Nacional hasta Sanlúcar de Barrameda. No se permiten vehículos a motor sin autorización de la administración del Parque.